นานมาแล้วที่นักวิทยาศาสตร์ทราบว่าภายในนิวเคลียสของเซลล์สิ่งมีชีวิตมีองค์ประกอบสำคัญที่เรียกว่า DNA ซึ่งเป็นแหล่งรวบรวมข้อมูลทางพันธุกรรมทั้งหมดของสิ่งมีชีวิต ประกอบด้วยน้ำตาลไรโบส หมู่ฟอสเฟต และไนโตรจีนัสเบส แต่ก็ยังไม่สามารถอธิบายความสามารถในการเก็บและถ่ายทอดข้อมูลทางพันธุกรรมได้ DNA (deoxyribonucleic acid) เป็นสารพันธุกรรมที่ประกอบด้วยพอลินิวคลีโอไทด์ (polynucleotide) 2 สาย พันกันเป็นโครงสร้างเกลียวคู่ (double helix) มีลักษณะคล้ายบันไดเวียนขวา โครงสร้างเกลียวคู่มีความกว้าง 2 nm เกลียวแต่ละรอบห่างกัน 3.4 nm. แต่ละนิวคลีโอไทด์จะประกอบด้วย น้ำตาลดีออกซีไรโบส หมู่ฟอสเฟต และไนโตรจีนัสเบส (A T C และ G) พอลินิวคลีโอไทด์ทั้ง 2 สายยึดติดกันด้วยพันธะไฮโดรเจนระหว่างเบสคู่สม (A คู่กับ T และ C คู่กับ G) ————————————-
DNA Francis Crick ��������� ����ö�������������ѹ�������� ������ ��� DNA ������������ѹ�������ͧ��������Ե ������Ҵ���ᵡ��ҧ�ѹ�ҡ��ó��ͧ����������Ҩ�ը��� (genome) �����������ѹ�������������� DNA ���� RNA ������ ����Ҩ������������������������������� (linear) ǧ��ǹ (circular) ����������¡�ѹ (segments) �����ҧ�ҡ�����ͧẤ�����������������Ե����٧ ��������õչ�����Ѻ�ѹ����Ѻ��� DNA ������ٻ��ҧ������Ѵ ������¡��������� (chromosome) (�Ҿ��� 2) ����Ấ������ ���������� ��Сͺ���� DNA �������������Դǧ��ǹ�Ѻ�������Ѻ�õչ������Դ ����������¡�����Ǥ����´� (nucleoid) ������������������������������������������Ե����٧ ��� DNA ��������ѡɳ�����Ѻ����Ѻ��� (histone) ����õչ��Դ���� ��������ѹ���˴����ͧ��� DNA �����������ö��è�������ǹ���������ͧ������ �͡�ҡ������������ ���������Ե����٧�ѧ���չ����������ǹ�ͧ organelle ���� ����ת�����չ������������� (mitochondria) �������þ��� (chloroplast) �ա��ǹ˹�������Ԥ Polymerase Chain Reaction (PCR) �Ҿ��� 1 ͧ���Сͺ����ç���ҧ�ͧ DNA ��èѺ���ѹ�ͧ�ʤ�����ͧ��� DNA �ͧ��·�������ѡɳ�����Ǥ�� ��Ѻ��ȷҧ (����� : Alberts ��Ф��, 1983) �Ҿ��� 2 ��� DNA ����Ǥ��ѹ�Ѻ�õչ���˴�����������ҵչ������������������������ (����� : Freifelder, 1985) ��ѡ��âͧ PCR ����ѡ�������ҹ�����ѧ������������� ��������ҡ���������� �������Ẻ˹������������� DNA poloymerase ������ѹ��������������Դ��ҡ������� �������֡�������������Ѻ�� �� PCR ����ö�ѧ��������������������� 2 ���������ѹ ����������� (primer) 1 ��� ��ԡ����� PCR �� 3 ���� �����ع���¹ ������ͧ�ѹ� ���������������������ͧ������������á ���¡��� denaturing ������¡����� ��� �� �������Ẻ�ҡ��Ҿ����������� ������������������س������٧ 92-95o��������ͧ���¡��� annealing ���������Ŵ�س�����ŧ����Ѵ���������� ������� ��� �� ������ � (��Сͺ������Ǥ����䷴�ӹǹ 14-13 ��) ��������Ѻ ����������Ѻ�� ��� �� �������Ẻ�Ѻ����ѹ ����������س��������ǧ 37-60o ������� 3 ���¡��� extension ����������ѧ�������� ��� �� ����������ѧ����������ҡ��ǹ���� 5 �ͧ������� ������������������ �������Ẻ��������������������ҹ�ͧ����������������������� (DNA polymerase) ���������������ö���ҹ��������ش����س����� 72-75o � �������������������������������� �س���ѵ������������������ͧ��ԡ����� ��ʹ�����������Ҿ��� 3 ��ѡ���������������������ҳ������� �����Ԥ PCR(����� : PE applied Biosystems)�ҡ������� 1-3 ����Ѻ���ӹǹ 1 �ͺ (one cycle) ���������Ե�����������������������Ѻ����������Ѻ��������������Ẻ����������ͧ��� ������Ѵ����Դ��ԡ������١���ҡ������ 1 �֧ 3 ��ع���¹��ա���� � �ͺ����������ҳ��������� �ҡ��� ����ҳ�����ԡ����� 20 �ͺ ����ö��������ҳ����������������������� 100,000 ��� ����������������ͧ���ԡ����� PCR ���ͧ�ҡ����� PCR ��������ҧ���������� ����������ʹ���ͧ �֧��ͧ�����������������������������������ͧ �����������������ҧ���������������� �����������ͧ����ԡ����� PCR ���ѧ�������
����ͧ��������ҳ������� (PCR machine) ����ͧ Thermal cycler ���� PCR machine ������ͧ������������� PCR �������ͧ�������������Ẻ��������к���鹡Ѻ����͡Ẻ�������Դ���ͧ����ѷ �����Ե ����Ӥѭ�����ͧ����ö��Ѻ����¹�س�������������������������������ҹ��ع���¹�ѹ���� � �ͺ����������������ҹ������������¹�ŧ�س����� �����������������������ҹ�ѡ����������������������� denaturing annealing ��� extension �������ǧ 15 �Թҷ� �֧ 10 �ҷ� �ѧ��������������ҳ����������Ը� PCR 25-40 �ͺ ������������ҳ 1.5-5 ����������������������Ե��������ҡ��ԡ����� PCR �����������Դ�ҡ��ԡ����� PCR ���ʹ��ͧ���������ö�ͧ��������������� �ѧ���������Ǩ�������������Ե����ͧ��������ҧ����� PCR ���¡��������������Ԥ������¡��� agarose gel electrophoresis ���������¡��������������������������� (Agarose gel) �������ҧ��������������ö�������������������Ѻ��Ҵ�ͧ������������������������ �����������¡���Ը��������ö�ͧ������������������������� ��������ͧ�ʧ������͡Ѻ�ʧ�ص��������ŵ ��������ᶺ����������ͧ�ʧ������� (�Ҿ��� 4)�Ҿ��� 4 ᶺ�����������¡����������Ը� agarose gel electrophoresis������������� ethidium bromide �����Ҿ������ʧ ultraviolet ����ª���ͧ PCR ������Ǩ�ԹԨ����ä �Ѩ�غѹ����Ѻ����� PCR ���Ԥ�Ӥѭ�ҡ��ҹͳ�������š�� ���������ҹ����ҹ���ͧ��Ժѵ��������֧�������ء�����ҧ���ᾷ���������ɵ�����ö�������ԹԨ����ä��ҧ � ����ä�Դ��������ä�ҡ�ѹ������ �֡�������ѹ�����������ѹ����ͧ�ѹ�����������չ ��Ἱ����չ����֡�����Ѻ���ͧ�չ�ͧ��������Ե���ء��Դ ���������ͧ���ҡ�Ԥ�������ö�����ӹǹ����������ʹ��֡�����������ҳ�ҡ������ѹ�Ǵ���� ������Ԥ���������������ª���ͧ PCR �ҧ��ҹ���ᾷ�� ���� �����Ǩ�ԹԨ����ä�������Ǩ���������������Ấ��������������˵��ͧ�ä (�� �ä�ʹ��,�ѳ�ä,��������) �����Ǩ���չ�������� (�� ����������,�����������˭�) �������ª���ͧ PCR �ҧ���ᾷ�������������������ԹԨ����ä������ͧ�ѹ����ѡ��������ҧ������Է���Ҿ�ҡ�������ҧ��ҹ����ɵ� PCR �����ҷ�ҡ��ҹ��ҹ�����Ѻ��ا�ѹ����ת �����Ǩ�ͺ����ѹ����ת �����Ǩ�ԹԨ����ä����ѹ����ת��ҹ�ҹ�ä ����֡����������ѹ�������ҧ�ת�Ѻ�����ä�������֡���չ�Ѻ������ � �ͧ�ת��������ä �������ʴ��͡�ͧ�չ���������� ����Ԥ PCR ���������������֧�ѹ�������ͧ�����ä�ת��� �ת����� ��ʹ����������������ͧ�ѹ�ӨѴ�ä�ת����Դ�ҡ������ Ấ������ �������� �����������˵��ä��� ��������Ԥ PCR ���١��������ص��ˡ����������§��� ����� �ص��ˡ������͡�������������Ѻ������� 4-5 ������ҹ�ҷ����� ����Ѩ�غѹ����ɵ�����������ʺ�ѭ���ҡ�ä�кҴ��������§��� ��������������Ե������͡�������������٭����������֧���� 1-2 ������ҹ�ҷ ���˵��ͧ�ä�кҴ��������� ��ǹ�˭��Դ�ҡ��������������ͧ���Ԥ PCR ������Ǩ�ͺ ���������ö��ͧ�ѹ�������кҴ�ͧ�ä���ѹ��ǧ�� �͡�ҡ�������Ѵ���͡����ѹ�������������������������ѹ�������������û�ǹ�ѹ�ء��� (genetic diversity ���� Variation) �٧���������ö���Թ������������Ը�����Ѵ���͡���������Է���Ҿ ����١��ͧ�֧�дѺ �ѹ��������������ͺ������ҡ ��Ƿ. |